Penentuan Kadar Protein Metode Kjedahl

Penentuan Kadar Protein Metode Kjedahl

Prinsip dari metode Kjeldahl melibatkan perhitungan kadar nitrogen total dalam makanan dan konversi dari persentase nitrogen dalam protein, dianggap bahwa semua nitrogen dalam makanan tersedia dalam bentuk protein dan dan menggunakan factor konversi berdasarkan persentase nitrogen dalam protein, yaitu:

 

% protein = % N x F

 

Di mana : F adalah factor konversi = 100 /  ( % nitrogen dalam makanan )

Terdapat 3 tahap analisis, yaitu: Tahap destruksi, tahap destilasi, dan tahap titrasi

1.      Tahap destruksi

Dalam metode Kjeldahl, sejumlah makanan direaksikan dengan H₂SO₄ pekat , Na₂SO₄ anhidrat /K₂SO₄ (untuk meningkatkan titik didih), Katalis ( Cu, Ti, Se, atau Hg).

Dalam prosesnya, Nitrogen dalam makanan dikonversi menjadi ammonium sulfat:

 

N (food)  à (NH₄)₂SO₄

 

2.      Tahap Destilasi

Dalam tahap destilasi, ammonium sulfat yang terbentuk pada tahap destruksi dikonversi menjadi ammonia dengan cara dipanaskan bersama NaOH:

(NH₄)₂SO₄  +  2NaOH  à  Na₂SO₄  +  2H₂O  +  2NH₃

 

Amoniak yang diperoleh dikumpulkan dalam asam borat berlebih:

2NH₃ +  2H₃BO₃  à 2NH₄H₂BO₃

1.      Tahap Titrasi

Hasil dari tahap destilasi yang berupa amonium borat dititrasi dengan asam sulfat standar atau HCl standar:

2NH₄H₂BO₃  +  H₂SO₄ à  (NH₄)₂SO₄  +  2H₃BO₃

Atau

2NH₄H₂BO₃  +  2HCl  à  2NH₄Cl  +  2H₃BO₃

 

Dari persamaan di atas:

 1 mol H₂SO₄  =  2 mol N              atau               1 mol HCl       =  1  mol N

Catatan:

Asam borat boleh diganti dengan HCl berlebih sehingga ammonia yang dihasilkan membentuk NH₄Cl. Sementara sisa HClnya dititrasi dengan NaOH

Pada saat destilasi        :           NH₃ + HCl_berlebih à NH₄Cl + HCl_sisa

Pada saat titrasi                        :           HCl_sisa  +  NaOH  à NaCl  +  H₂O

Cara Kerja:

Langkah kerja:

§  Timbang 1 g sampel yang telah dihaluskan, lalu, masukkan ke dalam labu kjeldahl.
§  Tambahkan 10 gram garam Kjeldahl (3 gr CuSO₄ dan 7 gram K₂SO₄) dan 20 mL H₂SO₄ pekat, lalu panaskan dalam lemari asam hingga berhenti berasap. Teruskan pemanasan. dengan menggunakan api besar sampai mendidih dan cairan menjadi jernih
§  Lakukan pemanasan tambahan selama ±1 jam. Lalu setelah itu matikan api pemanasan dan biarkan bahan menjadi dingin.
§  Tambahkan 25 mL aquadest ke dalam labu kjeldahl berisi bahan yang sudah didinginkan.  Lalu tuangkan ke labu ukur 100 ml, tambahkan aquades lagi sampai tanda batas. Rangkai alat destilasi.
§  Ambil 25 ml larutan dari labu ukur hasil pengenceran tadi ke dalam labu deslasi dan encerkan hingga ½ bagian labu lalu tambahkan beberapa butir logam Zn kemudian pasangkan pada rangkaian alat destilasi.
§  Tambahkan 25 mL larutan NaOH 50% (^w/_w) (melalui still head, lalu tutup kembali), lalu mulai pemanasan.
§  Tampung destilat dalam gelas kimia /ertenmeyer berisi 25 mL larutan HCI standar 0,1 N dan indikator metil merah. Lakukan destilasi hingga semua NH₃ tertampung dalam larutan HCI std. (± tertampung 75 ml)
§  Titrasi sisa HCI dengan larutan NaOH standar 0,1 N hingga TA (jingga merah).
§  Hitung kadar Nitrogen dalam sampel.

(% protein = % N x faktor)

Berikut Video Tutorial yang dapat menjadi rujukan metode tersebut. Semoga Bermanfaat....

Penentuan Kadar Protein Metode Kjedahl